1.3 实验技术
1.3.1 样品的制备
紫外-可见吸收光谱的测定通常是在溶液中进行的。固体样品需转变成溶液，无机样品需用合适的酸溶解或用碱熔融，有机样品需用有机溶剂溶解或抽提。有时需先用湿法或干法将样品消化，然后再转化成适用于光谱测定的溶液。溶剂的选择，除要满足溶解能力强、挥发性小、毒性小等要求外，特别要注意的是要在被测波长范围内没有明显的吸收。表1-1给出了紫外-可见吸收光谱测定中常用的溶剂的截止波长。
表1-1 紫外-可见吸收光谱测定中常用溶剂的截止波长
注：截止波长即为紫外响应信号的终止波长。
1.3.2 测量条件的选择
（1）吸光度范围
根据Lambert-Beer定律可以推导出当T =36. 8%，或A=0.434时，吸光度测量误差最小。一般选择A测量范围为0.2～0.8（T%为65%～15%），在此范围内，浓度测量相对误差较小。
（2）入射光波长
入射光的波长一般选择λmax。这是因为在λmax处测量时灵敏度最高，由仪器单色性变化引起的测量误差小。当然在待测组分浓度较大、超出吸光度测量范围或者该波长下存在共存杂质干扰等因素时，也可以选择其他的波长进行测定。
（3）狭缝宽度
有两种表示狭缝宽度的方法：一种是狭缝实际宽度（用mm表示），另一种是光谱带宽（用nm表示）。
狭缝宽度直接影响测定的灵敏度和工作曲线的线性范围。狭缝宽度小，杂散光小，但入射光较弱；狭缝宽度大，单色性差，工作曲线的线性范围窄。狭缝宽度的选择应该在保证吸光度不减小的前提下，尽量选择宽度较大的狭缝，一般选择试样吸收峰半宽W1/2的1/10。
（4）溶液的酸度
溶液的酸度直接影响被测组分存在的形式及数量，从而严重影响吸收峰的形状、位置和强度。在进行紫外-可见光谱测定中应严格控制被测溶液的pH，一般可通过加入缓冲溶液来控制。强酸、强碱以及弱酸-弱碱盐等都可作为缓冲溶液。
（5）参比溶液
通常采用以下三种参比溶液。
①溶剂参比溶液 当待测组分溶液的组成较为简单，共存的组分在测定波长的光吸收很小时，可用溶剂作为参比溶液，这样可以消除溶剂、吸收池等因素的影响。
②试剂参比溶液 如果显色剂或其他试剂在测定波长有吸收，用与显色反应相同的条件，但不加入试样，同样加入试剂和溶剂作为参比溶液。这种参比溶液可消除试剂中的组分产生吸收的影响。
③试样参比溶液 如果试样基体（除被测组分以外的）在测定波长处有吸收，而与显色剂不起显色反应时，可不加显色试剂但按与显色反应相同的条件处理试样，作为参比溶液。这种参比溶液适用于试样中有较多共存组分，加入的显色剂的量不大，且显色剂在测定波长处无吸收的情况。
（6）测定条件
在建立紫外-可见分光光度方法时，应进行显色剂用量、溶液酸度、显色反应时间、温度等因素对该方法影响的条件实验，确定最佳值。