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第十一节 血清α-淀粉样蛋白测定
α-淀粉样蛋白(α-amyloid protein,AAP)又称淀粉样蛋白A,分子量约12kD。现在已发现AAP为至少由4种分别由不同基因表达的异质类蛋白家族。血浆中AAP的主要功能包括:与血浆高密度脂蛋白( HDL)结合,转运胆固醇到肝脏代谢;募集免疫细胞至炎症部位;诱导降解细胞外基质的酶表达; AAP降解产物能以淀粉样蛋白A原纤维的方式沉积在不同的器官中,参与慢性炎症病理组织学改变。急性时相反应时,在IL-1、IL-6和肿瘤坏死因子等细胞因子刺激下,肝细胞、被激活的巨噬细胞、成纤维细胞乃至脂肪细胞都可大量表达AAP,血浆浓度可升高100~1000倍,而其半衰期只有50分钟左右,因此,是一种灵敏的正性急性时相反应蛋白。临床检测血清α-淀粉样蛋白( serum α-amyloid protein,SAA)主要用各种定量免疫学方法,以免疫比浊法和酶联免疫吸附法多用,下面以准确、特异的免疫比浊法为例介绍。
【原理】
抗人SAA多或单克隆抗体与样本血清中SAA通过抗原-抗体反应特异性结合,形成免疫复合物微粒,导致浊度增加。在一定条件下,浊度的增加与免疫复合物微粒数即SAA数相关,得以定量样本中SAA浓度。浊度检测包括散射浊度法和透射浊度法2类(参阅本章第二节血清白蛋白测定中的免疫比浊法)。下面以SAA的散射浊度法测定为例介绍。
【试剂】
选用有正式批文、量值可溯源至人血清α-淀粉样蛋白国际1级参考物的质量可靠产品。下面以SAA散射浊度法某试剂盒为例。
该试剂盒由冻干的包被有羊抗人SAA多克隆抗体的聚苯乙烯颗粒、复溶剂;已溯源至人SAA国际1级参考物的标准液;含高浓度SAA的人血清冻干质控品及复溶液;血清样本稀释液组成。
【操作】
不同实验室具体反应条件会因所用仪器和试剂而异,在保证方法可靠的前提下,应按仪器和试剂说明书设定测定条件,进行定标品、质控样品和样品分析。
【结果计算】
根据待测样本散射光,仪器根据系列稀释的SAA定标品浓度,以多点定标方式建立的曲线或方程式,自动计算出样本中SAA浓度。
【参考区间】
成人血清SAA (散射浊度法) : <6.4mg/L (此参考区间引自试剂说明书)。
【注意事项】 1.方法学特点
本法对人SAA的批内CV≤6.2%、批间CV≤6.4%。轻中度黄疸、严重溶血(血红蛋白<10g/L)血清标本对本法无显著干扰。但脂血对本法有明显干扰,需高速离心获取清澈血清再测定。
2.影响因素
有关散射浊度法的一些共同影响因素,参阅本章第二节血清白蛋白测定中免疫比浊法的注意事项。
3.参考区间应用
以其他定量免疫学方法,包括透射比浊法及散射免疫浊度法不同厂家试剂盒测定的结果均存在差异,应建立使用方法的本实验室参考区间。
【临床意义】
1.作为急性时相反应蛋白,SAA和C-反应蛋白一样可用于:了解机体急性时相反应程度;辅助鉴别细菌性和除腺病毒外的其他病毒性感染,评估抗菌药疗效和停药指征;早期发现器官移植后排斥反应等。由于前述急性时相反应中SAA大幅度升高及短半衰期特点,有研究认为SAA比C-反应蛋白更敏感。但红斑狼疮和溃疡性结肠炎者SAA升高并不明显。
2.近年来SAA被发现是动脉粥样硬化、急性冠脉综合征、2型糖尿病等疾病的高相对危险度的独立危险因素,尚有待进一步证实。