红细胞血型抗体鉴定是血型抗体筛查后的进一步检查。一旦抗体被检出，应作抗体鉴定试验，以确定其特异性。

抗体鉴定应有的样本信息:受检者的血型，包括ABO、Rh以及其他必需的血型;以往输血史及妊娠史;临床诊断，尤其是自身免疫性溶血性贫血( AIHA) ;药物治疗史(包括Rh免疫球蛋白) ;如果以往曾有过血型鉴定，应进一步了解以往试验方法等;与随机供者红细胞反应阳性的频率和强度;试验时有无溶血现象及剂量效应等。

红细胞血型抗体鉴定需使用谱细胞( panel cells)。

谱细胞一般由8～16人份已知血型抗原组成的单个供者的O型红细胞组成。可选择市售试剂，也可根据情况自行制备。谱细胞中的红细胞表型应包括Rh、Kidd、MNSs、Duffy、Diego、Xg、Kell、Lewis、P及Lutheran等血型系统的主要抗原，为了提供Rh系统中复合抗体(如抗-Ce)与混合抗体(如抗-C +抗-e)的鉴定依据，谱细胞中Rh的基因型也应加以标明(如R ₁R ₁，R ₁R ₂)。如有条件对其他特殊抗原可以另列一栏加以说明，如对低频率及高频率抗原是阴性还是阳性。通常一套谱细胞应尽可能包括多种抗原决定簇，以及一些缺乏某种抗原决定簇的红细胞。谱细胞中应包含针对有剂量效应抗体的相应纯合子抗原细胞。谱细胞的组合原则是，可有效鉴定常见的有临床重要性的抗体，如抗-D、抗-E、抗-K、抗-Fy ^a等，且不覆盖其他抗体，对大多数单一抗体( single antibody)和多种混合抗体( multiple antibody)鉴定方便。为了保证抗体鉴定的正确性，要求每个抗原有足够的阳性和阴性细胞，从而使血清学检查的结果表现出客观的规律而不是偶然的结果。应注意结果判定时使用正确对应的谱细胞反应格局。通常谱细胞保存于特殊保养液中，试管法中谱细胞浓度一般为2%～5%，应在有效期内使用。

实验包含以下主要内容:

观察受检者的血清与受检者自身细胞的反应情况，确定血清内是否有自身抗体或自身抗体和同种抗体二者同时存在。

使用谱细胞，应用各种抗体检查技术，检测受检者的血清，结合谱细胞反应格局，确定其抗体的特异性。还需同时检测受检者的红细胞表型进行验证。

当患者体内的同种抗体有两种或两种以上时，可采用吸收放散试验。

抗体鉴定的方法无统一的规定，须灵活应用盐水法、白蛋白介质法、抗人球蛋白试验、低离子强度溶液法、聚凝胺法及凝胶法等各种技术(图1-5-2、图1-5-3)。一般应包括盐水法( 4℃、室温及37℃)、抗人球蛋白试验，必要时再结合吸收放散试验及用巯基乙醇( 2-ME)或二硫苏糖醇( DTT)处理的血清分析抗体特异性。各种方法均应包含自身对照。如反应格局较弱，可使用增效剂。

LISS和PEG均可增强反应，减少孵育时间。但LISS和PEG也可增强自身抗体反应，对同时包含自身抗体和同种抗体的样本应慎用。

某些抗体在室温或4℃时反应更佳，如抗-M，抗-N，抗-P1，抗-Le ^a，抗-Le ^b和抗A ₁等。由于有些血清中也包含抗-I或其他冷自身抗体，此时自身对照尤为重要。

红细胞使用量不变而增加血清的体积可增强某些低效价抗体的反应。可使用5～10倍体积的血清与1体积的2%～5%红悬液在37℃孵育60分钟。孵育中定期混匀可促进红细胞与抗体的接触。如增加血清使用量，三洗前离心去除血清有助于洗涤完全，但洗涤次数不应超过4次。如使用增效剂，则不可增加血清比例。

孵育时间为30～60分钟有利于增加反应强度，但如使用LISS或PEG时则不可延长孵育时间。

如DTT和2-ME，可破坏IgM抗体的二硫键或某些红细胞抗原。以下情况可使用巯基试剂:①确定抗体的亚类时;②IgM混合IgG抗体的鉴定，特别是IgM抗体掩盖IgG抗体时;③分离结合有IgM自身抗体的红细胞时;④有目的地破坏某些红细胞抗原时(如Kell、Dombrock、LW和Knops系统的某些抗原)。

吸收、放散试验视试验目的可单独使用，也可结合使用，适用于以下情况:①分离单个样本中存在的多种抗体时;②鉴定同种抗体时除去自身抗体;③除去人源试剂中的其他抗体(通常为抗A、抗B或两者皆有) ;④通过吸收含已知特异性抗体的血清，确定红细胞存在相应的抗原;⑤确定某些只可被特定表型红细胞吸收的抗体的特异性。

要对谱细胞的反应结果有正确的解释，必须首先对一些特异性抗体的血清学特性进行了解，再分析反应结果。

确定抗体特异性时可以综合运用以下的实验结果中的信息。

1.观察受检血清与每个试剂谱细胞的反应结果。

2.观察受检血清与其自身细胞的反应结果。

3.观察反应的格局，检查每个反应相的结果，包括不同的温度、介质作用的情况，一些抗体的特异性与反应介质直接相关。

4.是否溶血现象。在阳性反应的细胞中，反应强度有否不同，是否出现剂量效应。

5.对自身红细胞上的抗原详细检查，从所缺少的抗原情况，提示是否存在相应的抗体。

不规则抗体能造成严重的输血反应，有些抗体与特定疾病有关，如新生儿溶血病、流产、寒冷性阵发性血红蛋白尿等。因此抗体筛查和鉴定在提高输血的安全性、有效性以及某些疾病的诊断和防治方面有重要意义。

在传统的试管法中，增效剂PEG相对于LISS，尽管假阳性率相对更高，但也更为敏感。而在鉴定有临床意义的抗体以及直接抗球蛋白试验方面，凝胶法较试管法敏感性更高( P＜0.01)。如怀疑由免疫性抗体导致直抗阳性而抗体筛查试管法结果为阴性时，应进行更全面的检测。自动的固相法在抗体鉴定方面与手动凝胶法相当，而一项对手动固相法、自动固相法和使用增效剂PEG的方法比较研究结果显示，手动固相法敏感性最好而特异性最差，自动固相法敏感性最差但特异性最好，PEG法则敏感性特异性均居中。