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第七节 交叉配血试验
交叉配血试验又称血液相容性试验，是确保患者安全输血必不可少的试验。完整的操作规程应包括:查阅受血者以前的血型检查记录，如与这次检查结果有所不同，可以及时分析原因;对受血者血样进行ABO正反定型和RhD抗原检测，必要时可增加其他血型抗原的检查;选择预先进行血型检查的合格供血者作交叉配血试验。
交叉配血主要是检查受血者与供血者血液之间有没有相应的抗原-抗体反应，包括主侧与次侧配血。使用受血者血清加供血者红细胞的一管称为“主侧”;使用供血者血清加受血者红细胞的一管称为“次侧”。
除非在紧急用血的情况下，任何一次输注红细胞之前都要进行交叉配血试验。
对于当前或是以往筛查出含有临床意义抗体的患者，即便是看上去没有抗原-抗体反应，也要选择缺少相应抗原的血液进行输注。除了盐水介质交叉配血，还要进行可检出IgG类血型同种抗体的交叉配血试验，如抗人球蛋白介质检测。抗人球蛋白介质交叉配血可以采用与抗体筛选及抗体鉴定一致的方法，也可以采用不同的方法。例如，使用试管法与柱凝集法来进行交叉配血。
一、盐水介质交叉配血试验
【原理】
红细胞上携带有ABO抗原，当和相应的抗体结合(如A型红细胞遇到含有抗A的B型血清)之后，就会产生肉眼可见的凝集。所以当受血者和供血者细胞经混合并离心后，如有ABO不配合问题，就会很快显示出来，所以常称为“立即离心”( immediate spin，IS)配血试验。用来检测供者红细胞与受血者血清之间的ABO相容性。
【试剂】
生理盐水。
【操作】
1.用生理盐水将受血者红细胞制备2%～5%盐水悬液。
2.从供血者血液保存袋上的辫子中获取少量血样，分离血清，生理盐水三洗红细胞，并用生理盐水将供血者红细胞制备2%～5%盐水悬液。
3.取洁净小试管( 10mm×60mm) 2支，1支标明受血者血清( PS) +供血者细胞( DC)或“主侧”;另1支标明供血者血清( DS) +受血者细胞( PC)或“次侧”。
4.按标记“主侧”管加受血者血清2滴，加供血者红细胞悬液1滴。“次侧”管放供血者血清2滴，加受血者红细胞悬液1滴。混匀，以3400r/min ( 1000×g)离心15秒，轻轻晃动试管，肉眼观察结果。
【结果判定】
1.肉眼观察，如果试管中出现任何红细胞凝集或溶血，则判读为阳性，无凝集为阴性。
2.对于不能明显判定为阴性而并未达到阳性凝集的反应，可通过显微镜进一步判读。镜下有红细胞凝集的反应为阳性，无凝集的为阴性。
3.如果试验在室温进行，若有凝集产生，可置37℃放置2分钟后观察凝块是否散开，以排除冷凝集素造成的凝集影响测定结果。
【注意事项】
如盐水介质配血结果阴性，可将原标本接着做抗球蛋白法配血。若输注洗涤红细胞，可以只做“主侧”配血而不做“次侧”配血。
二、抗球蛋白交叉配血试验
【原理】
一些针对红细胞上血型抗原的IgG类不完全抗体，结合到红细胞上之后，必须通过抗球蛋白试剂的连接，才能形成肉眼可见的凝集。当供血者或受血者血液中存在相应的不规则抗体时，可能会导致迟发型溶血反应的发生。所以，抗球蛋白交叉配血试验常用来检测IgG抗体引起的不相容性。抗球蛋白介质交叉配血可以使用试管法、固相化方法来进行。
【试剂】
抗人球蛋白试剂，对照试剂: IgG致敏红细胞悬液，O型红细胞悬液，AB型血清。
【操作】
1.取试管2支，分别标明“主侧”和“次侧”，“主侧”管加受血者血清2滴和供血者2%～5%红细胞盐水悬液1滴;“次侧”管加供血者血清2滴和受血者2%～5%红细胞悬液1滴。
2.混合，置37℃水浴致敏30分钟，取出后用生理盐水洗涤红细胞3次，在吸水纸上扣干残余液体。
3.加抗人球蛋白试剂1滴，混匀，3400r/min ( 1000×g)离心15秒，观察结果。
4.阳性对照: 2%～5% IgG致敏红细胞悬液1滴，加抗人球蛋白试剂1滴;阴性对照: 2%～5% O型红细胞悬液1滴，加抗人球蛋白试剂1滴;盐水对照: 1管供血者2%～5%红细胞盐水悬液1滴加生理盐水1滴;另1管受血者2%～5%红细胞盐水悬液1滴加生理盐水1滴。
【结果判定】
如阳性对照管凝集，阴性对照管、盐水对照管不凝集，“主侧”、“次侧”配血管都不凝集，表示受血者与献血者相匹配，可以进行输注。
三、柱凝集法交叉配血试验
【原理】
柱凝集法交叉配血是通过抗原-抗体在凝胶卡的反应室中反应后，离心通过预先装填有抗IgG的凝胶柱。凝集的红细胞将会被截留在凝胶柱的顶部或柱体中，而不凝集的红细胞则将在凝胶柱的底部。
【试剂】
柱凝集配血卡。
【操作】
1.取凝胶抗球蛋白微柱卡，标记1号(“主侧”)，2号(“次侧”)。
2.主侧 配制细胞悬液，通常情况下使用供应商提供的稀释液将献血者红细胞配成1%的悬液(根据厂商的操作说明书而定) 50μl轻轻滴入1号微管反应池中，再加25μl受血者血清。
3.次侧 配制细胞悬液，通常情况下使用供应商提供的稀释液将受血者红细胞配成1%的悬液(根据厂商的操作说明书而定) 50μl轻轻滴入2号微管反应池中，再加25μl献血者血清。
4.阴性对照 配制细胞悬液，通常情况下使用供应商提供的稀释液将受血者红细胞配成1%的悬液50μl轻轻滴入2号微管反应池中，再加25μl AB型血清。
5.将已加好反应物的凝胶卡放入37℃孵育15分钟。
6.取出凝胶卡，立即用专用离心机离心，通常离心的速度被设定在1000r/min ( 80×g～100×g)离心10分钟后，观察结果。
【结果判定】
1.若对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中判读为阳性。结果判断参照图示(见图1-5-1)。
2.若对照管和检测管的细胞沉淀均在管底判读为阴性。
3.若对照管细胞在胶上或胶中说明试验失败，应重新试验。
【注意事项】
1.每种柱凝集卡都分为反应室和凝胶柱两部分，操作时，向反应池内要先加红细胞悬液，后加血清或抗体。
2.不同的厂商所提供的柱凝集试验要求的细胞与血清的比例不同，一般50μl 1%红细胞悬浮加25μl血清; 50μl 0.8%红细胞悬浮加40μl血清。
3.除上述两种配血方法之外，常用的还有快速的聚凝胺介质配血、LISS介质配血以及增强反应的酶法配血等。这些方法具有一些局限性，通常用于特殊情况下的配血，操作中的注意事项参见“红细胞血型抗体筛查”一节。
四、聚凝胺法交叉配血试验
【原理】
见本章第四节中聚凝胺试验。
【试剂】
见本章第四节中聚凝胺试验。
【操作】
1.主侧配血 向试管中加入患者血清2滴和献血者2%～5%红细胞悬液1滴。次侧配血:向试管中加入献血者血清2滴和患者2%～5%红细胞悬液1滴。
2.立即以1000×g离心，观察结果。如果阴性则继续试验;如果阳性，需分析原因排除干扰后继续后续试验。
3.加0.6ml LIM试剂，室温放置1分钟。
4.加入2滴polybrene试剂，立即以1000×g离心1分钟，弃去试管中液体，轻摇试管，肉眼判断红细胞凝集情况。如果有凝集出现则继续操作。如果没有凝集出现则该试验无效。
5.加入1滴重悬液，轻摇试管，肉眼观察结果。
【结果判定】
1分钟内凝集消失为聚凝胺试验阴性，1分钟内凝集不消失为聚凝胺试验阳性。
【注意事项】
1.通常情况下，使用LISS和LIM试剂作为缩短抗原-抗体的反应时间是同时有效的。
2.加入重悬液后，应尽快观察结果，以免弱反应消失。
3.肝素会中和聚凝胺的作用，应避免用肝素抗凝的血样。
4.聚凝胺方法不适合Kell系统抗体的检测，所以对阴性结果需进行抗球蛋白试验，以免漏检。黄种人中Kell系统抗体极罕见。
【临床评价】
盐水法交叉配血简单、方便、快速，但不能检出不完全抗体引起的交叉配血不配合。而且盐水法对于操作人员的操作技能与专业判断能力有一定的要求。有一定几率会导致试验结果出现假阴性。
试管法抗球蛋白介质交叉配血是一种安全可靠的交叉配血方法。在盐水法的基础上，抗人球蛋白介质增加了对不完全抗体( IgG抗体)引起的检测。但试管法抗球蛋白介质交叉配血试验操作复杂、时间长，很难应用于紧急配血试验。同样对于操作人员的操作技能与专业判断能力有一定的要求。
柱凝集法能对微弱的抗原或抗体进行反应，大大提高了试验的敏感度，便于自动化、标准化，重复性好，结果稳定，结果观察直观。但孵育、离心时间较长，不适用于特别紧急的配血。