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第四节 血清前白蛋白测定
前白蛋白( prealbumin,PA)又称前清蛋白,分子量约55kD,血浆半衰期为1.9天,为肝脏细胞合成的糖蛋白,因电泳时迁移在白蛋白之前而得名。PA的生理功能为组织修补材料和运载蛋白。PA可结合大约10%的T 4和T 3,对T 3亲和力更大;此外,脂溶性维生素A以视黄醇形式存在于血浆中,先与视黄醇结合蛋白形成复合物,再与PA以非共价键形成视黄醇-RBP-PA复合物运输,该复合物一方面可避免视黄醇氧化,另一方面可防止小分子的视黄醇-RBP复合物从肾丢失。
血清PA可用电泳和免疫学方法测定。电泳法操作较繁杂耗时,准确性和重复性差,不适合常规临床检验。测定PA的免疫学方法包括免疫电泳、放射免疫、酶联免疫吸附试验、化学或电化学发光免疫法、荧光免疫法和免疫浊度法等。目前临床检验测定PA多用免疫浊度法。
【原理】
抗人PA抗体加入样本血清中,通过抗原-抗体反应与血清中PA特异性结合,形成PA-抗PA抗体复合物微粒,导致浊度增加。在一定的条件下,如合适的抗原、抗体浓度,一定的免疫复合物微粒径/入射光波长比值等,浊度的增加与免疫复合物微粒数即PA数相关,得以定量PA浓度。免疫浊度法对浊度改变的检测包括散射浊度法和透射浊度法2类方法(参阅本章第二节血清白蛋白测定的免疫比浊法)。透射浊度法在多数自动生化分析仪上即可完成,较多使用。
一、检测方法
1.手工检测 【试剂】
选用有正式批文、量值可溯源至人血清蛋白质参考物CRM 470的质量可靠产品。下面以PA透射浊度法某试剂盒为例。
( 1) pH 7.2的磷酸盐缓冲液( 12.7mmol/L) : 含NaCl 0.13mol/L,聚乙二醇( PEG) 60g/L及防腐剂。
( 2)抗人PA抗体工作液。
( 3) PA定值血清(冻干品) :使用前按说明书加指定量的缓冲液复溶。
【操作】
按表2-1-6进行。
表2-1-6 PA测定手工操作步骤
混匀,37℃反应10分钟,波长340nm以空白管调零,读取各管吸光度
【结果计算】
2.自动化分析仪检测 【试剂】
同“1.手工检测”。
【操作】
不同实验室具体反应条件会因所用仪器和试剂而异,在保证方法可靠的前提下,应按仪器和试剂说明书设定测定条件,进行定标品、质控样品和样品分析。
【结果计算】
自动生化分析仪可根据系列浓度标准品自动制作的Logit-log曲线,计算出待测样本的血清PA浓度。
3.注意事项 ( 1)方法学特点:
本法的人血清PA最低检测限为15mg/L,可报告范围为30~800mg/L,批内及批间CV均≤2.0%。超过报告范围上限的样本需用生理盐水对半稀释血清后,重新测定,结果乘以稀释倍数。黄疸、中度溶血及类风湿因子<100IU/ml标本对本法无显著干扰,但脂浊及高甘油三酯血清对本法有负干扰。
( 2)影响因素:
有关透射浊度法的一些共同影响因素,参阅本章第二节血清白蛋白测定中免疫比浊法的注意事项。
( 3)参考区间应用:
以其他定量免疫学方法,包括散射免疫浊度法测定的结果与本法存在差异,应建立使用方法的本实验室参考区间。
( 4)标本稳定性:
血清标本如不能及时测定,应置2~8℃冰箱保存,可稳定2天。
二、参考区间
成人血清PA浓度(透射浊度法)为250~400mg/L ( 4.55~7.28μmol/L),儿童约为成人水平的一半,青春期急剧增加达成人水平。2种单位间可按mg/L×0.0182 =μmol/L换算。
三、临床意义
由于PA半衰期仅1.9天,短于其他肝脏表达释放的血浆蛋白,为反映营养状态及肝功能的敏感指标,也是一种敏感的负性急性时相反应蛋白。
1.评价营养不良 PA在200~400mg/L为正常,100~150mg/L轻度营养不良,50~100mg/L中度营养不良,<50mg/L严重营养不良。
2.评价肝功能不全 肝功能损伤时PA降低,比Alb和转铁蛋白更敏感,对早期肝炎及重症肝炎有特殊诊断价值。
3.负性急性时相反应蛋白 在急性炎症、恶性肿瘤、创伤等急需合成蛋白质的情况下,血清PA均迅速下降。
4. PA浓度增高可见于霍奇金病。